總巰基測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

分光光度法  50 管/24 樣注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

生物體內(nèi)巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì)， 而且參與活性氧清除，后者對(duì)于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過(guò)測(cè)定總巰基含量和 GSH 含量，能夠間接測(cè)定蛋白質(zhì)巰基含量。

測(cè)定原理

巰基基團(tuán)與 5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm 處有最大吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品

天平、研缽、可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 40 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 3 mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品的制備

（1）   動(dòng)物、植物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測(cè)。

（2）   血清，培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

操作步驟